平行16-PMT光谱FastFLIM
Overview of Evident (奥林巴斯)
通过ISS升级套装,FV1000,FV1200,FV3000和FVMPE-RS共焦显微镜系统可以被轻易地扩展,拥有荧光寿命成像 (FLIM) 和荧光相关光谱 (FCS) 功能。光子计数探测确保了对低信号的灵敏度。可以采用内部的探测器或是将外部探测器添加至系统。数据是用以下两个模式中的一个采集的:FastFLIM (数字频域) 或是SWISS卡 (数字TCSPC,时域)。尽管模式的选择取决于用户的喜好,FastFLIM直接提供了适用于相位图分析的数据格式。该套装还包括了VistaVision,用于数据收集及处理。
奥林巴斯FCS和FLIM升级包包括以下物品
FastFLIM单元或TCSPC单元 | 每一个单元接受来自探测器的输出信号 (通过BNC) 和来自奥林巴斯共焦顶部的同步信号。 |
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探测器 | 选项有:
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外部探测器 | 快速PMT、混合型PMT、或SPAD。 |
激光发射器 (对于多光子系统来说不是必须的) |
可用于3-、4-和6-激光器。激光光束被叠加,并且激光发射器的输出通过光纤被连接到显微镜。 |
由ISS提供电脑运行的VistaVision | 高性能电脑,32 GB RAM,带有32"平板显示器 |
Product Specifications for Evident (奥林巴斯)
采集和分析软件
- ISS的VistaVision
荧光波动光谱 (FFS) 测量
- 荧光相关光谱 (自相关和互相关)
- 光子计数直方图 (PCH)
- 图像中位于目标XYZ位置的FFS测量
- FLCS,荧光寿命相关光谱
- 扫描FCS
- 数量与亮度 (N&B)
成像模块测量
- 单点 (强度、偏振、寿命)
- 单个平面和z堆栈 (偏振图像、比例法、FLIM)
超分辨率模块
- 粒子追踪
- 纳米成像
FLIM图像 (数字频域) (单平面和z堆栈)
- 通过数字频域 (DFD) 获得。该程式同时获取FLIM图像和稳态图像。
FLIM图像和时域 (单个平面和z堆栈)
- 通过时间相关单光子计数 (TCSPC) 获取
单分子模式
- 突发分析
- FRET和相关方法
- PIE-FRET方法
光源
- 激光二极管:370 - 1000 nm
- 钛蓝宝石激光器
激光发射器
- 3、4、6激光器模型。
- 光通过单模式光纤被送至显微镜。
输入通道
- 2个
探测器
- 内部
- (原先的) PMTs
- 外部
- GaAs PMT (H7422P型号)
- 混合型PMT (R10467U型号)
CLK
- 像素、行、帧
FLIM图像数据采集最小滞留时间
- 4 µs/像素
单元控制
- USB
电脑
- 高性能处理器,32 GB RAM,Windows 11,64比特
- 32"显示屏,2556 x 1440分辨率
Evident (奥林巴斯)的产品配件
产品资源
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“Single-cell imaging of α and β cell metabolic response to glucose in living human Langerhans islets.” Azzarello, F., Pesce, L., Lorenzi, V.D., Ferri, G., Tesi, M., Guerra, S.D., Marchetti, P. & Cardarelli, F. Communications Biology, 5(1), 2022, Nov. doi: 10.1038/s42003-022-04215-w.
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“Two-Photon Intravital Fluorescence Lifetime Imaging of the Kidney Reveals Cell-Type Specific Metabolic Signatures.” Hato, T., Winfree, S., Day, R., Sandoval, R.M., Molitoris, B.A., Yoder, M.C., Wiggins, R.C., Zheng, Y., Dunn, K.W. & Dagher, P.C. Journal of the American Society of Nephrology, 28(8), pp. 2420–2430, 2017, Mar. doi: 10.1681/asn.2016101153.
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“Imaging Sensitivity of Quiescent Cancer Cells to Metabolic Perturbations in Bone Marrow Spheroids.” Cavnar, S.P., Xiao, A., Gibbons, A.E., Rickelmann, A.D., Neely, T., Luker, K.E., Takayama, S. & Luker, G.D. Tomography, 2(2), pp. 146–157, 2016, Jun. doi: 10.18383/j.tom.2016.00157.
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“Fluorescence Lifetime Imaging of Apoptosis.” Xiao, A., Gibbons, A.E., Luker, K.E. & Luker, G.D. Tomography, 1(2), pp. 115–124, 2015, Dec. doi: 10.18383/j.tom.2015.00163.
奥林巴斯LSM升级配置
升级可以通过以下两种方式之一实现:
- 通过增添两个外部的PMT (双探测器单元或mini-TDU);当无法通过奥林巴斯获得探测器时,该解决方法是首选 (图1)。
- 利用系统的内部PMT (图2).